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文件名稱: | Efficient Inactivation of Symbiotic Nitrogen Fixation Related Genes in Lotus japonicus Using CRISPR- |
公司名稱: | PhD Technology LLC |
下載次數(shù): | 1599 |
文件詳細(xì)說明: | |
對(duì)生命現(xiàn)象中各種重要基因功能的研究,經(jīng)常需要把這些基因在大腸桿菌、酵母等體系中表達(dá)并純化蛋白。將所培養(yǎng)的大腸桿菌細(xì)胞(2升)離心并用小體積(~25毫升)溶液重懸。通過使用PhD高壓均質(zhì)機(jī)(D-3L),在15000Psi壓力下經(jīng)過一次破碎,即可達(dá)到超過95%以上的破碎率,并且通過外接的冷卻循環(huán)系統(tǒng)可以保證菌液在低溫下破碎,更好的保障了目標(biāo)蛋白的結(jié)構(gòu)及功能的完整性。
該實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)于我們順利發(fā)表文章是非常重要的:(Wang et al., 2016. Efficient Inactivation of Symbiotic Nitrogen Fixation Related Genes in Lotus japonicus Using CRISPR-Cas9. Front. Plant Sci., http://dx.doi.org/10.3389/fpls.2016.01333)。
同時(shí),在另外一個(gè)待發(fā)表的課題中,我們利用D-3L高壓均質(zhì)機(jī),在低溫下破碎萊茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii),也得到了很高的破碎效率(>95%)。與之相比,超聲法破碎裂解衣藻細(xì)胞的效率比較低(經(jīng)過多次破碎,還有約50%左右的細(xì)胞保持了結(jié)構(gòu)的完整),而且耗時(shí)較長、且往往伴隨局部過熱現(xiàn)象。 綜合比較,研究人員發(fā)現(xiàn),在實(shí)驗(yàn)中通過使用PhD高壓均質(zhì)機(jī)處理多種不同樣品一般都可以較好的破碎效果。
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